5. Koncentrationsbestämning av flucytosin-svamp

Från Referensmetodik för laboratoriediagnostik

Till innehållsförteckningen för Referensmetodik:Svampinfektioner

---

Bilaga 5

Flucytosin, koncentrationsbestämning med biologisk metod

Indikation

• Kontrollera att:
  • -Terapeutiskt effektiva nivåer erhålls
  • -Toxiska nivåer ej uppnås

Princip : Med agardiffusionsmetod beräknas den aktiva koncentrationen av Flucytosin (5-Fc) i serum utifrån kända koncentrationer (standard) av samma antibiotikum. En agarplatta med jäststam, känslig för 5-Fc, förses med standard och patientprov i brunnar.

Plattan inkuberas över natt.

Hämningszonerna runt standarden mäts och sätts mot det logaritmiska värdet för varje koncentration. Det ger en linjär kurva ur vilken patientprovets koncentration kan beräknas.

Reagens

• YNB-agarplattor 75 mL agar/platta
• Humanserum
• 5-Fc standard 200 - 6,25 mg/L spädd i humanserum
• Förvaras i frys -20 °C
• Hållbar 1 år. Får frysas om
• Oberoende kontroll t.ex. 50 mg/L
• McFarland 0,5
• Jäststam Candida albicans H29

Provsättning

• -Märk en YNB-agarplatta med C. alb H29 och lab.nr. Så in agarplattan med en suspension av C. albicans motsvarande McFarland 0,5
• -Täck hela agarytan
• -Sug av överflödet
• -Torka i termostat 35 °C ~ 10 min
• -Stansa hål diam (3 mm) i agarplattan, 4 st hål för standard och 2 st för varje patientprov
• -Märk hålen: 1 st hål för varje standardkoncentration, 2 st hål för varje patientprov och 2 st hål för oberoende kontroll
• - Sätt 10 µL/hål, frys ner resten av serumet
• - Inkubera i 37 °C över natt
• - Mät hämningszonerna runt varje brunn

Uträkning

• Det logaritmiska värdet på standardens antibiotikakoncentration sätts mot zondiametern så man får en linjär standardkurva.

Ekvationen y = kx + 1 vilken lämpligen är programmerad i en kalkylator.

Mata in standardens och patientprovets zondiametrar i kalkylatorn

Prestanda Metodvariation ± 20% för dubbelprov

Mätintervall 6,25 - 200 mg/L

Om patientvärdet är >200 mg/L kan provet spädas i humanserum så att det hamnar inom mätintervallet

Referensintervall

• Prov före dos ~ 25 mg/L
• Prov efter dos ~ 25 mg/L - 100 mg/L